诱发肿瘤动物模子的建设
原理：诱发性肿瘤动物模子是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。。。
实验质料：肿瘤细胞、小鼠
试剂：无血清作育基质、3%中性甲醇、石腊等
仪器耗材：低温离心机、血球计数器、游标卡尺等
实验办法
一、肝癌
1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌
（1）取体重250 g左右的关闭群大白鼠，，，，，牝牡不拘；；；
（2）按性别分笼饲养。。。除给通俗食物外，，，，，饲以致癌物，，，，，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，，，，，剂量为10 mg/kg，，，，，每周一次，，，，，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，，，，，任其自由饮用；；；
（3）共约4个月可诱发成肝癌；；；
（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。。。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌
（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，，，，，饲料中维生素B2 不应凌驾1.5～2 mg/kg；；；
（2）4～6月就有大宗的肝癌诱发乐成。。。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌
（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；；；
（2）逐日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），，，，，3～4月后有80～90%动物爆发肝肿瘤。。。
4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：
（1）用剂量为逐日0.3～14 mg/kg体重，，，，，混于饲料或饮水中给予；；；
（2）6～9个月后255/300大鼠爆发了肝癌。。。
5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌
（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，，，，，隔日一次，，，，，每次2～3滴，，，，，一样平常涂100次。。。
（2）实验后7～8周即而泛起第一个肝肿瘤，，，，，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。。。
（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，，，，，给C3H小鼠皮下注射4次，，，，，逐日距离10天，，，，，也可诱发成肝癌。。。
6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌
（1）逐日饲料中含0.001～0.015 ppm，，，，，混入饲料中喂6个月后，，，，，肝癌诱发率达80％。。。
二、胃癌
1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌
（1）取20 g左右的小鼠，，，，，无菌手术下，，，，，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。。。
（2）含MC的线结是用通俗细线，，，，，在一端打结后，，，，，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，，，，，在酒精灯上微微加温，，，，，使MC液化渗入线结。。。MC浓度为0.05～0.1 g 20-甲基胆蒽内浸入10～20根线。。。
（3）手术埋线后4～8个月可诱发乐成胃癌。。。
2．差池称亚硝胺诱发小鼠胃癌
剂量为0.25 ml/kg体重，，，，，3个月后所有动物爆发前胃乳头状癌，，，，，7～8个月后有85～100%爆发前胃癌。。。昆明种最敏感。。。A系次之，，，，，615系小鼠敏感性最差。。。
3．甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌
给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素，，，，，剂量为2 mg/kg体重，，，，，每周饮用5次，，，，，520天后所有大鼠均爆发了腺胃癌。。。
三、食管癌
1．甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌
（1）取体重100 g以上的Wistar大鼠；；；
（2）任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，，，，，并将MBNA掺入饲料中使逐日摄入量达0.75～1.5 mg/kg体重；；；
（3）80～100天可诱发成食管癌。。。
2．二烃黄樟素（Dihydrosafrole）诱发大鼠食管癌
（1）二烃黄樟素是一种制备啤酒的调味品，，，，，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000 ppm）黄樟素，，，，，就能引起20～75%的食管癌。。。
3．甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌
（1）用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水溶液，，，，，给动物经口灌喂，，，，，天天一次，，，，，大鼠灌注剂量为1 mg/kg体重；；；
（2）至第27天即发明一例食管乳头状瘤，，，，，154天发明第一例食管癌，，，，， 11个月食管癌的爆发率为53%。。。
四、肺癌
1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌
（1）小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，，，，，每次剂量56 mg/kg，，，，，DEN总剂量抵达868 mg；；；
（2）视察时间为100天左右时，，，，，发癌率可达40%。。。
（3）DEN总剂量抵达1176 mg，，，，，视察时间为半年左右时；；；发癌率可达94%。。。
2．乌拉坦诱发肺腺癌
（1）小鼠（A系，，，，， 1～11/2月龄）较大鼠敏感，，，，，每次每只腹腔注入10%乌拉坦心理盐水液0.1～0.3 ml，，，，，距离3～5日再注，，，，，共注2～3个月，，，，，每只小鼠用量约为 100 mg；；；
（2）注后3个月肺腺癌爆发率为100%，，，，，并且大都为多发性，，，，，这种诱发瘤为良性。。。
3．苯并芘诱发肺腺癌
（1）猴气管内注入3，，，，，4-苯并芘（苯并花为3～15 mg与等量之Fe2O3混淆液），，，，，每周一次，，，，，共10次；；；
（2）6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。。。
4．硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌
（1）用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入；；；
（2）13个月后所有大鼠都爆发了肺腺癌。。。
5．甲基胆蒽诱发肺腺癌
（1）用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混淆后给金地鼠气管内注入，，，，，每次0.1 ml（含甲基胆蒽 5 mg）每周一次，，，，，共6次；；；
（2）53周后有62.5%动物爆发了肺癌。。。
五、鼻咽癌
1．二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌
（1）取直径2～3 mm的硬质塑米管，，，，，在酒精灯上小火拉成锥形，，，，，每段长约3.5 cm，，，，，管内填以结晶体MC。。。
（2）小管一端用火关闭，，，，，以防药物外溢，，，，，尖端用针刺数孔，，，，，使MC能从小妃溢出。。。
（3）取体重120 g左右的大白鼠，，，，，牝牡均可，，，，，乙醚麻醉后，，，，，由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，，，，，使用前鼻孔较小管粗端为小的特点，，，，，稍加用力，，，，，迫使小管所有进入鼻腔内，，，，，其尖部可达鼻咽腔。。。不需另加牢靠，，，，，即可使小管恒久留于鼻腔内。。。
（4）待到预准时间（半年以上），，，，，或动物自行殒命时，，，，，到其鼻咽部，，，，，10%福尔马林牢靠，，，，，脱钙后，，，，，石蜡包埋，，，，，举行一连切片。。。发癌率可达60%以上。。。
2．二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌
（1）取120 g左右大白鼠，，，，，牝牡均可，，，，，乙醚麻醉后，，，，，用磨平针尖的8号针头，，，，，以前鼻孔轻轻插入，，，，，针尖可达鼻咽腔；；；
（2）经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次，，，，，共15～20次，，，，，可诱发成鼻咽癌。。。
六、宫颈癌
1．二甲基胆蒽（MC）诱发宫颈
取雌性小白鼠，，，，，以附有0.1 mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，，，，，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，，，，，将线穿入宫颈。。。经右宫角背部穿出，，，，，使线结牢靠于宫颈口。。。线的另一端则牢靠于背部肌肉，，，，，缝合皮肤，，，，，挂线以后，，，，，同日最先一连注射青霉素2～3天。。。以防术后熏染。。。至一准时间（半年左右）正法动物，，，，，宫颈组织用10%福尔马林牢靠，，，，，石蜡包埋，，，，，一连切片。。。
七、结肠癌
1．二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，，，，，DMH）诱发鼻咽癌
（1）给周围龄的雄性大白鼠，，，，，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，，，，，DMH）每周一次，，，，，一连21周，，，，，每次 DMH21 mg/kg；；；
（2）最后一次给药后1～4周，，，，，正法动物；；；
（3）降结肠部位用Bouin液牢靠，，，，，脱水，，，，，石蜡包埋，，，，，切片。。。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液，，，，，并加EDTA37 mg，，，，，用氢氧化纳（0.1 N）液将pH调至6.5备用。。。
注重事项
1．要设计差别的实验组和比照组，，，，， 每组动物数一样平常为 5-10 只；；；
2．一样平常接种肿瘤6-8 周后，，，，，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临殒命) 时，，，，， 可眼球取血，，，，，疏散血清并生涯血清，，，，， 正法小鼠，，，，， 取肿瘤组织照相，，，，， 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或- 80℃ 生涯)，，，，， 作响应的免疫组织化学染色 ，，，，， 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛牢靠，，，，， 石腊包埋，，，，， 作通例HE 染色。。。
其他说明
1．芳香胺及偶氮染料类致癌物的特点
（1）通常需要恒久、大宗给药才华致癌；；；
（2）肿瘤多爆发于远隔作用部位的器官如膀胱、肝等；；；
（3）有显着的种属差别；；；
（4）其自己不是直接致癌物，，，，，致癌是由于其某种代谢产品的作用；；；
（5）其致癌作用往往受营养或激素的影响，，，，，例如，，，，，奶黄仅在以缺少卵白质和核黄素的饲料喂饲大鼠时才引起肝癌，，，，，并且雄性大鼠较敏感，，，，，邻位氨基偶氮甲苯则易起雌性大鼠的肝癌。。。
2．亚硝胺类的致癌特点
（1）致癌性强，，，，，小剂量一次给药即可致癌；；；
（2）对多种动物（包括猴、豚鼠等不易诱发肿瘤的动物）的许多器官（包括食管、脑、鼻窦等不易引起癌的器官）能致癌，，，，，甚至可以通过胎盘致癌，，，，，如给有身大鼠以二乙基亚硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可较量快地引起仔鼠的神经胶质细胞瘤；；；
（3）具有差别结构的亚硝胺有显着的器官亲和性，，，，，例如二甲基亚硝胺等对称的衍生物常引起肝癌，，，，，差池称的亚硝胺如甲基苄基亚硝胺常诱发食管癌；；；在大鼠，，，，，二丁基亚硝胺能引起膀胱癌，，，，，二戊基亚硝胺能诱发肺癌，，，，，而N-甲基-N-硝基-N-1-亚硝基胍则能引起胃肠癌。。。
3．黄曲霉毒素的致癌特点
（1）黄曲霉毒素的毒性很强，，，，，很小剂量（1mg/kg体重）即可使狗、幼龄大鼠、火鸡或小鸭致死；；；
（2）其致癌性也极强，，，，，最小致癌剂量比亚硝胺还要小数十倍，，，，，是已知化学致癌物中作用最强者；；；
（3）它能诱发多种动物（从鱼到猴）的肝癌，，，，，也可引起肾、胃及结肠的腺癌，，，，，滴入气管内可引起肺鳞状细胞癌；；；
（4）注入皮下可引起局部的肉瘤，，，，，尚有报告以为，，，，，它可引起泪腺、乳腺、卵巢等其它部位的肿瘤。。。
4．其他
在动物实验中早已确定：乙硫氨酸可诱发大鼠肝癌；；；乌拉坦（氨基甲酸乙酯，，，，，C２H５O－CONH２）、氨乙胺可引起小鼠的肺癌；；；一些卤代烃如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。。。
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