裸鼠成瘤实验

2016-01-19

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美高梅药理学效劳为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验，，，，，详情可联系获得。。。。。邮箱：marketing@medicilon.com.cn 电话：021 58591500。。。。。

裸鼠效劳流程

1、操作计划设计
2、要领开发
3、细胞制备
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤动物实验要领

分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染目的基因（每组6只）。。。。。
细胞准备及注射裸鼠要领：到动物室准备实验。。。。。

取出未作处置惩罚的小鼠和处置惩罚后小鼠用鼠笼，，，，，顺序摆放在超净台中。。。。。选体形较大的小鼠称重，，，，，以3μl/g剂量，，，，，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。。。。。约5分钟，，，，，小鼠最先进入清静状态，，，，，将其仰卧牢靠。。。。。切忌镇痛剂过量使用。。。。。

(1)铺白布于鼠板上，，，，，仰卧位牢靠小鼠四爪，，，，，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。。。。。消毒两次。。。。。铺手术巾于小鼠上，，，，，在其左侧剪口（4*4cm），，，，，袒露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。。。。。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，，，，，袒露腹壁肌肉，，，，，镊子牵拉腹壁肌肉，，，，，避开腹腔内脾脏，，，，，剪开腹壁肌肉，，，，，袒露内脏。。。。。用棉签蘸PBS，，，，，拨出脾脏下极，，，，，切忌牵拉，，，，，以免损伤脾脏和胰腺。。。。。
(2)找到脾脏同时，，，，，用25微升Matrigel混淆于细胞管中，，，，，打悬细胞沉淀，，，，，使细胞疏散匀称成单细胞悬液。。。。。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，，，，，稍退针芯，，，，，打出气泡，，，，，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门偏向约2mm最先注射细胞，，，，，注射完毕停留约30秒钟，，，，，缓慢退出针，，，，，以防细胞渗透。。。。。同时用蘸PBS的棉球榨取周围出血点止血。。。。。
(3)用注射器吸收庆大霉素注射液（专心理盐水250：1稀释）约400微升，，，，，注入腹腔，，，，，棉球蘸干皮缘渗透的抗生素。。。。�？？？？？Ｗ钕确旌细贡诩∪猓ㄒ涣旌�4针）。。。。。再次用注射器吸收庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，，，，，棉球蘸干。。。。。缝合皮肤（中止缝合4针）。。。。。碘伏棉球消毒缝合口。。。。。吊销牢靠，，，，，使小鼠处于自然体位，，，，，放于鼠笼中。。。。。
(4)所有细胞注射完毕，，，，，剪耳标记，，，，，纪录剪耳标记及分组情形。。。。。
Day5-7：注重小鼠的状态，，，，，实时发明小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、熏染等殒命的情形。。。。。
Day42：颈椎离断，，，，，正法小鼠，，，，，剖解遗体，，，，，视察脾脏肿瘤生长状态，，，，，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。。。。。所有可疑组织均做好标记，，，，，照相，，，，，若有外貌结节，，，，，计数后，，，，，冻于液氮中。。。。。视效果情形用10%甲醛溶液牢靠住宿后做病理。。。。。

裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞状态是成瘤实验的要害，，，，，以是细胞生长状态一定要好，，，，，取处于对数生恒久的细胞，，，，，细胞达80-90%左右密度为宜;网络细胞前一天晚上替换新鲜作育基。。。。。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，，，，，目的为去除细胞中的血清。。。。。
3、用PBS或者无血清作育基奏乐细胞沉淀至合适的浓度，，，，，一样平常皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，，，，，接种体积为0.1ml，，，，，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml。。。。。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，，，，，一样平常只管在半小时内完成，，，，，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。。。。。
5、选择的裸鼠一样平常在5-8周龄，，，，，体重18-20g左右，，，，，莳植部位选择血供富厚区域，，，，，如腋窝中后部、腹股沟中上部。。。。。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，，，，，避免细胞成团而降低细胞成活率。。。。。
7、接种时，，，，，针头在皮下进针深一点，，，，，约1cm深，，，，，镌汰注射后细胞悬液从针眼溢出。。。。。
8、怎样抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，，，，，小拇指夹住裸鼠尾巴。。。。。

9、接种后一周左右可以见到皮下最先泛起肿块。。。。。
10、凭证肿瘤细胞的特征和接种细胞的量，，，，，一样平常皮下成瘤的周期为1-2个月。。。。。肿瘤不宜生长过大，，，，，一样平常不要凌驾1000mm3 ，，，，，肿瘤负荷过大常�；；；；；嵋晕シ炊锫桌矶辉又旧绲竽�(由于这个问题凄凉地被plos one拒过稿）。。。。。
11、肿瘤巨细丈量一样平常为1周两次，，，，，游标卡尺丈量肿瘤最长和最短部位。。。。。V=1/2*a*b2 (a为长轴，，，，，b为短轴)。。。。。
12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提卵白和RNA，，，，，一部分福尔马林牢靠用做免疫组化、免疫荧光等。。。。。

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